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封闭剂如何选择
浏览: 发布日期:2020-05-19
1.SA是一种常用的密封剂,单一成分适用于大多数情况。如果牛血清白蛋白的免疫原性与牛血清白蛋白的免疫原性相结合,就会产生许多抗牛血清白蛋白的抗体。为避免交叉反应,牛血清白蛋白和脱脂奶粉不应用于封闭,但可使用酪蛋白或非蛋白封闭剂。大多数牛血清白蛋白中残留少量抗体,导致抗原/抗体之间的交叉反应,产生高背景、高数量的杂散带或升高的背景水平。
2.血清阻断的原理主要基于两个方面。首先,在待测样品中会有一些与蛋白质非特异性结合的物质,从而产生高背景,因此非特异性结合可以被牛血清白蛋白或血清阻断。第二,待测样品中可能有Fc受体,它能结合到抗体不变区,与抗体的特异性无关。密封的血清中有抗体,因此一级抗体和二级抗体与样品Fc受体之间的结合可以用血清密封。牛血清白蛋白不能阻断Fc受体。
3.脱脂奶粉具有价格便宜的优点,但由于其成分相对复杂,其应用范围应该受到限制。磷酸化抗体可能导致背景增加,此外,因为它们含有生物素,所以不能用于生物素标记的抗体系统。
4.酪蛋白和牛血清白蛋白功能相似,普通酪蛋白不易溶解。中性和碱性条件下带负电,相同负电荷的胶体金具有排斥力,且膜一般为正电荷,酪蛋白会有一定的吸附作用,酪蛋白封闭效果更好。
5.无甲醛蛋白复合物:与聚偏氟乙烯膜表面的微结构发生反应或结合,使其失去结合蛋白的疏水或空间结构域。吐温-20 (tween-20):吐温-20是一种非离子去污剂,作为复性抗原,疏水吸附到膜上。对非特异性吸附有很强的洗脱效果。它还可以降低蛋白质之间的疏水性,提高特异性识别能力。
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